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科普篇 | 多重数字PCR技术在呼吸道病原菌检测中的应用

来源: | 作者:/ | 发布时间: 2023-11-02 | 288 次浏览 | 分享到:

相信大部分人都出现过呼吸道感染相关疾病,其中,下呼吸道感染是最常见的感染性疾病,引起下呼吸道感染常见的病原体有肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎支原体、大肠杆菌、结核杆菌等,治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。

图一:图片来源于网络

针对病原体的检测一个绕不过的关卡就是培养法和药敏检测。即使在不含任何的苛养菌情况下,也需在检验科培养1-2天才能出结果(分子检测的时效性,准确性和灵敏度都高于培养,但培养准确率也属于够用的程度),3-4天出药敏结果。再说最近IVD领域最为火热的领域,莫过于NGS。基因测序的通量高,可检测未知病原体,但是检测周期较长,检测费用昂贵,不适合临床推广使用。感染性疾病,临床往往需要简单、直接和确定的结果,但是mNGS带来的新发现可能并非惊喜,而是困惑和风险。临床需要一个相对广谱、覆盖常见病原的检测技术,弥补当前感染性疾病检测的短板,让检测更加可及。

多而全不一定合适,快速和精准才是关键。随着技术的发展,第三代PCR技术-数字PCR,作为分子诊断领域的佼佼者,在病原体核酸检测方面显示出巨大优势。

在病原体核酸检测方面的巨大优势:



01



摆脱病原体检测对标准品的依赖

荧光定量PCR技术的最大瓶颈在于需要依赖标准曲线,而且扩增效率的差异会直接导致实验室内或者不同实验室之间的荧光定量PCR检测结果的偏差。数字PCR基于单分子层面的检测可以摆脱对标准品的依赖,且不受PCR抑制物的影响,尤其是在缺乏标准品的检测项目中,数字PCR可用于直接定量病原微生物的拷贝数。

02



灵敏度高

在病原微生物的检测方面,数字PCR利用其灵敏度高的特点,能检测低至几拷贝的病毒载量,可以用于早期诊断和用药的低拷贝病毒的监控。

03



多重数字PCR提高检测效率

多通道数字PCR,例如伯乐新推出的QX600,拥有6-色检测通道,可单孔内检测多种病原微生物,大大提高检测效率,节约样本。

04



大大缩短报告周期

使用数字PCR检测临床标本无需经过病原微生物培养过程,大大缩短了报告周期,使快速检测潜在的病原微生物成为可能,且利于从大量不同的背景核酸中检出病原微生物,对于感染性疾病的诊断和控制意义重大,有助于及时减少患者服用无效药物的数量,及早采用其他备用药物。


柏创翌生物-数字PCR检测平台


1、Bio-Rad QX200数字PCR系统,拥有FAM、HEX(VIC)2荧光通道。将20ul反应体系采用液滴反应器形成20000个油包水反应体系,PCR反应结束后,采用流式细胞术的原理,检测每一个液体,数阳性反应的液滴数量。


2、Bio-Rad QX600数字PCR系统,拥有6-色检测通道 (FAM, HEX, Cy5, Cy5.5, ROX, ATTO 590),每个样本反应孔可实现6荧光通道的检测。QX600微滴阅读仪是专为用户提供精确和灵敏的多重检测而设计,可实现准确和可重复的结果,系统具有跨平台兼容性以及全新升级的强大的软件。

图二:QX600数字PCR系统


3、在病原微生物检测方面的应用,本平台可检测的病原种类单纯疱疹病毒1型(HSVⅠ)、单纯疱疹病毒2型(HSVⅡ)、肠道病毒(EV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、人疱疹病毒6型(HHV6)、人类乳头瘤病毒(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV33)等、多形拟杆菌(Bt)、普拉梭菌(F.prausnitzii),还可定制个性化病原检测服务。欢迎来电咨询!联系方式: 021-61283010