Actin变异系数高达47%!还能用作中枢神经系统内参吗?

1. Actin 水平高变异：跨病例样本的 β-actin 信号总强度范围呈现出极大的跨度，从 212 至 4,461 不等，变异系数高达 47% ！这一数据直观地表明，β-actin 在不同个体中的表达水平存在着显著的差异，其稳定性远不能满足内参蛋白的严格要求。β-actin 如此高的变异系数，无疑使其作为中枢神经系统 WB 实验内参的可靠性大打折扣，可能会对实验结果的解读产生严重的干扰 。

2. 与总蛋白比例不恒定：β-actin 在人中枢神经系统中与组织总蛋白的比例并不恒定，β-actin 水平并未反映起始总蛋白浓度 。内参蛋白的一个重要特性是与组织总蛋白保持恒定的比例关系，这样才能在实验中准确地校正目标蛋白的表达量。进一步证明了其不适合作为中枢神经系统 WB 实验的内参 。

3. 与其他因素的相关性：β-actin 的信号强度与年龄、中枢神经 pH、PMI（死后间隔时间）、中枢神经重量、病期（DI）等均没有显著相关性 。虽然从表面上看，这似乎符合内参蛋白不受这些因素影响的特点，但结合其表达水平的高变异系数以及与总蛋白比例的不恒定，这种 “不相关性” 并不能说明 β-actin 适合作为内参 。因为内参蛋白不仅要不受这些因素的影响，更重要的是要在不同样本中保持稳定的表达和与总蛋白恒定的比例关系 。而 β-actin 在其他关键方面的不足，使得它难以满足内参蛋白的综合要求，无法为中枢神经系统 WB 实验提供可靠的参照 。
   

Brian Dean教授研究组发现Ponceau S染色的总蛋白比β-actin作为中枢神经系统WB内参具有更低的变异系数（24~27%），强烈建议相关研究使用总蛋白染色内参。但Ponceau S染色因灵敏度相对较低、染色结果不稳定、背景干扰、颜色区分度欠佳等缺点，也会为实验者带来一定的使用不便。

匹兹堡大学Divay Chandra实验室研究了几种不同的Western Blot总蛋白染色方法的准确性和可重复性，以及这些方法对实验结果的影响，包括Ponceau S和Stain-Free（Bio-Rad免染）方法。其关键结论如下（参考文献2）：

参

考

文

献