在准确性要求高的实验,如基因筛选、克隆表达、突变检测、定点突变、测序中都倾向于使用高保真酶PCR酶。但是仔细想想,如果你的PCR模板是通过反转录(RT)得到的cDNA, 那cDNA合成有没有错配呢?细思极恐,RT酶可没有纠错能力,的确是会错配的。没有RT高保真,谈何PCR高保真!
Bio-Rad通过NGS实验来检测不同RT酶的错配,发现不仅有错配,还有插入和缺失产生,Oh My God! 万万没想到,实验的坑可真多啊!因此Bio-Rad创新推出高保真RT试剂盒 —iScript Select cDNA Synthesis Kit,采用修饰过的MMLV源iScript反转录酶,经过Illumina MiSeq二代测序平台检测,出错率仅有2.47 x 10-4, 保真性相比常规RT酶高4 – 10倍,实验设计和详细数据见Bio-Rad技术手册Bulletin 70761。
iScript Select cDNA Synthesis Kit还具有以下优点:
○ 宽广的线性范围,上样量从 1 pg - 1µg
○ 合成较长的cDNA片段,超过8 kb
○ 包含实验所需各个组分,只需加入RNA样品
○ 操作步骤简单,加入RNA样品后,一步孵育即可,无需65℃孵育后再冰上冷却然后再加剩余反应组分
配合Bio-Rad2的重组Sso-7d融合高保真PCR聚合酶iProof High-Fidelity DNA Polymerase 使用,给你的高保真实验带上双保险!而且速度非常快!
○ 保真性更高,是常规Taq酶的52倍
○ 速度更快,15–30 sec/kb的速度扩增15kb的模板仅需2小时20分,无需过夜反应
○ 产物长,成功扩增37kb的产物
○ 用量少,0.25 – 1 unit/反应
○ 提供20 unit小包装
1708896 iScript Select cDNA Synthesis Kit, 25 x 20 µl
1708897 iScript Select cDNA Synthesis Kit, 100 x 20 µl
1725300 iProof High-Fidelity DNA Polymerase, 20U
1725301 iProof High-Fidelity DNA Polymerase, 100U
1725302 iProof High-Fidelity DNA Polymerase, 500U
1725310 iProof HF Master Mix 100 x 50 µl reactions