柏辰生活

Bio-Chain Life

高保真PCR扩增,谨防入坑!

说到高保真酶我们首先想到的是PCR高保真酶。普通PCR酶具有 5' 到 3' 合成 DNA 的能力,但合成过程可能出现碱基错配(错配率在 10-5 碱基 / 循环),而高保真 Taq 酶具有 3' 到 5' 核酸外切酶的活性即纠错能力( Proofreading ),其错配率可下降几十倍到10-6数量级,大大降低了出错的可能性,也就是保真性非常好,保证了扩增的准确性。 

 

在准确性要求高的实验,如基因筛选、克隆表达、突变检测、定点突变、测序中都倾向于使用高保真酶PCR酶。但是仔细想想,如果你的PCR模板是通过反转录(RT)得到的cDNA, 那cDNA合成有没有错配呢?细思极恐,RT酶可没有纠错能力,的确是会错配的。没有RT高保真,谈何PCR高保真! 

 

Bio-Rad通过NGS实验来检测不同RT酶的错配,发现不仅有错配,还有插入和缺失产生,Oh My God! 万万没想到,实验的坑可真多啊!因此Bio-Rad创新推出高保真RT试剂盒 —iScript Select cDNA Synthesis Kit,采用修饰过的MMLV源iScript反转录酶,经过Illumina MiSeq二代测序平台检测,出错率仅有2.47 x 10-4, 保真性相比常规RT酶高4 – 10倍,实验设计和详细数据见Bio-Rad技术手册Bulletin 70761

 

 

                                    

 

 

iScript Select cDNA Synthesis Kit还具有以下优点:

○  宽广的线性范围,上样量从 1 pg - 1µg

○  合成较长的cDNA片段,超过8 kb

○  包含实验所需各个组分,只需加入RNA样品

○  操作步骤简单,加入RNA样品后,一步孵育即可,无需65℃孵育后再冰上冷却然后再加剩余反应组分

 

 

配合Bio-Rad2的重组Sso-7d融合高保真PCR聚合酶iProof High-Fidelity DNA Polymerase 使用,给你的高保真实验带上双保险!而且速度非常快!

○  保真性更高,是常规Taq酶的52倍

○  速度更快,15–30 sec/kb的速度扩增15kb的模板仅需2小时20分,无需过夜反应

○  产物长,成功扩增37kb的产物

○  用量少,0.25 – 1  unit/反应

○  提供20 unit小包装

 

订购货号:

1708896  iScript Select cDNA Synthesis Kit, 25 x 20 µl

1708897  iScript Select cDNA Synthesis Kit, 100 x 20 µl

1725300  iProof High-Fidelity DNA Polymerase,  20U

1725301  iProof High-Fidelity DNA Polymerase,  100U

1725302  iProof High-Fidelity DNA Polymerase,  500U

1725310  iProof HF Master Mix 100 x 50 µl reactions